Культур клеток

Животных

Индикация вирусов по следующим феноменам

Отставание в развитии,

гибель, изменение

оболочек эмбриона, РГА

ЦПД, образование бляшек, РИФ, РГадс, интерференция

Заболевание, гибель,

гистологические изменения

в тканях, включения

Титрование выделенного вируса; выбор рабочей дозы .

Титр вируса - максимальное разведение вируссодержащего материала, в котором еще наблюдается ожидаемый эффект (ЦПД, РГА, гибель животного).

Идентификация выделенного вируса в реакциях нейтрализации, РТГадс, РСК, подавление бляшкообразования и др. с диагностическими сыворотками. Вид (тип) вируса определяется по нейтрализации специфического эффекта вируса соответствующей иммунной сыворотокой.

Примечание: титрование и идентификация вируса проводится с использованием одного и того же феномена.

Культивирование вирусов

В лабораторной диагностике вирусных инфекций имеются три основных подхода

1) непосредственное исследование материала на наличие вирусного антигена или нуклеиновых кислот;

2) изоляция и идентификация вируса из клинического материала;

Прямые методы диагностики клинического материала

Прямые методы – это методы, которые позволяют обнаружить вирус, вирусный антиген или вирусную нуклеиновую кислоту (НК) непосредственно в клиническом материале, то есть являются наиболее быстрыми (2–24 ч).

Электронная микроскопия (ЭМ). С помощью этого метода можно обнаружить собственно вирус.

иммунная электронная микроскопия (ИЭМ), при которой применяются специфические антитела к вирусам. В результате взаимодействия антител с вирусами образуются комплексы, которые после негативного контрастирования легче обнаруживаются.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ). Метод основан на использовании антител, связанных с красителем

Метод РИФ широко применяется для быстрой расшифровки этиологии острых респираторных вирусных инфекций при анализе мазков-отпечатков со слизистой оболочки верхних дыхательных путей .

Иммуноферментный анализ (ИФА). Иммуноферментные методы определения вирусных антигенов в принципе сходны с РИФ, но основываются на мечении антител ферментами, а не красителями.

Радиоиммунный анализ (РИА). Метод основан на метке антител радиоизотопами, что обеспечивало высокую чувствительность в определении вирусного антигена.

Молекулярные методы. Первоначально классическим методом выявления вирусного генома считался высокоспецифичный метод гибридизации НК, но в настоящее время все шире используется выделение геномов вируса с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Молекулярная гибридизация нуклеиновых кислот. Метод основан на гибридизации комплементарных нитей ДНК или РНК с образованием двунитевых структур и на выявлении их

ПЦР основана на принципе естественной репликации ДНК. Суть метода заключается в многократном повторении циклов синтеза (амплификации) вирусспецифической последовательности ДНК с помощью термостабильной Taq ДНК-полимеразы и двух специфических затравок – так называемых праймеров.

Цитологические методы в настоящее время имеют ограниченное диагностическое значение, но при ряде инфекций по-прежнему должны применяться. Исследуются материалы аутопсии, биопсии, мазки, которые после соответствующей обработки окрашиваются и анализируются под микроскопом.

Для успешного выделения вирусов клинический материал должен быть взят в соответствии с патогенезом предполагаемого заболевания и в наиболее ранние сроки.

Как правило, берутся:

– при респираторных инфекциях – носоглоточный смыв;

– при энтеровирусных инфекциях – смыв и фекалии (рео-, энтеровирусы);

– при поражениях кожи и слизистых оболочек – соскобы, содержимое пузырьков (герпес, ветряная оспа);

– при экзантемных инфекциях – смывы (корь, краснуха);

– при арбовирусных инфекциях – кровь, спинномозговая жидкость.

Для выделения вирусов используют культуры клеток, лабораторных животных, эмбрионы кур. Процесс длительный, иногда требующий проведения нескольких пассажей, прежде чем вирус будет обнаружен и идентифицирован с помощью одного или нескольких методов – в реакции нейтрализации (РН), РИФ, ИФА или ПЦР.

Серодиагностика

Серологическая диагностика, основанная на реакции антиген – антитело, может быть использована для определения как тех, так и других, и играет роль в определении этиологии вирусной инфекции даже при отрицательных результатах выделения вируса.

РСК является одной из традиционных серологических реакций и используется для диагностики многих вирусных инфекций. В реакции принимают участие две системы: антитела сыворотки больного + стандартный вирус и эритроциты барана + антитела к ним, а также оттитрованный комплемент. При соответствии антител и вируса этот комплекс связывает комплемент и лизиса бараньих эритроцитов не происходит (положительная реакция). При отрицательной РСК комплемент способствует лизису эритроцитов. Недостатком метода является его недостаточно высокая чувствительность и трудность стандартизации реагентов.ИФ метод также, как ИФА, применяется для определения антител в сыворотке.

Вирусологическое исследование включает два основных этапа: выделение вирусов и их идентификацию. Материалом для вирусо­логического исследования могут быть кровь, другие биологические и патологические жидкости, биоптаты органов и тканей.

Вирусологическое исследование крови часто проводят с целью диагностики арбовирусных инфекций. В слюне могут быть обна­ружены вирусы бешенства, эпидемического паротита, простого герпеса, Носоглоточные смывы служат для выделения возбудите­лей гриппа и других ОРВИ, кори. В смывах с конъюнктивы обна­руживают аденовирусы. Из фекалий выделяют различные энтеро-, адсно-, рсо-, нора- и ротавирусы.

Для выделения вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы, иногда лабораторных животных.

Большинство патогенных вирусов отличает наличие тканевой и типовой специфичности, например, полиовирус репродуцируется только в клетках приматов, поэтому для выделения определенного вируса используют соответствующую культуру ткани. Для выделе­ния неизвестного возбудителя целесообразно одномоментное за­ражение 3-4 культур клеток, предполагая, что одна из них может оказаться чувствительной. Наличие вируса в зараженных культу­рах клеток определяют по развитию специфической дегенерации клеток, т.е. цитопатоген ном у действию, обнаружению внутрикле­точных включений, а также на основе выявления специфического антигена методом иммунофлуоресценции, положительных реак­ций гемадсорбции и гемагглютинации.

Эмбрионы птиц с их малодифференцированными тканями при­годны для культивирования очень многих вирусов. Чате всего ис­пользуют эмбрионы кур. При размножении в эмбрионах вирусы могут вызвать их гибель (арбовирусы), появление изменений на хори­он-аллантоисной оболочке (оспенные вирусы) или в теле эмбриона, накопление в эмбриональных жидкостях те маг гл ютин ино в (вирусы гриппа, паротита) и комплементе вязывающего вирусного антигена.

Идентификация вирусов осуществляется, с помощью иммуноло­гических методов: реакция торможения гемагтлютинации, связы- кание комплемента, нейтрализация, преципитация в геле, иммуно­флуоресценция.

Еще по теме Вирусологический метод:

1. Оценка основных антропометрических данных параметрическим методом (сигмальный метод)
2. Лечение по методу угашения условной связи и методу форсированной тренировки
3. 2. Сравнительно-правовой метод – частнонаучный метод юридической науки
4. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ И ВЫБОР МЕТОДА ЛЕЧЕНИЯ СУБМУКОЗНОЙ МИОМЫ МАТКИ
5. 5.4. Понятие и структура общего метода расследованиякак метода практической деятельности
6. Тема 8. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯИЗМЕНЧИВОСТИ И МЕХАНИЗМОВ ПЕРЕДАЧИНАСЛЕДСТВЕННОЙ ИНФОРМАЦИИ. ПРИМЕНЕНИЕГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДЛЯ СОЗДАНИЯ НОВЫХЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
7. Тема 15. ПАТОГЕННОСТЬ И ВИРУЛЕНТНОСТЬ МИКРООРГАНИЗМОВ. ФАКТОРЫ ВИРУЛЕНТНОСТИ. МЕТОДЫ ЗАРАЖЕНИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ. АНТИГЕНЫ, МЕТОДЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ. АНТИТЕЛА. РЕАКЦИИ ИММУНИТЕТА И ИХ ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ. ФАГОЦИТОЗ

КАБАРДИНО-БАЛКАРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ

УНИВЕРСИТЕТ им. Х.М.БЕРБЕКОВА

_________________________________________________________________

ОСОБЕННОСТИ РНК-ВИРУСНЫХ И ДНК-ВИРУСНЫХ

ИНФЕКЦИЙ
Методические рекомендации по изучению теоретического материала

по курсу «Частная медицинская вирусология»

для иностранных студентов
Для специальности 060101 – Лечебное дело

Нальчик - 2010

ББК 52.63я73

Рецензент:

кандидат биологических наук старший преподаватель кафедры микробиологии, гигиены и санитарии Кабардино-Балкарской государственной

сельскохозяйственной академии

М.Х. Пежева

Составитель: Блиева Лариса Заурбековна

Особенности РНК-вирусных и ДНК-вирусных инфекций: Методические рекомендации по изучению теоретического материала по курсу «Частная медицинская вирусология» для иностранных студентов - Нальчик: Каб.-Балк. ун-т,2010.- 48 с.

В методических рекомендациях представлены цели и задачи каждой темы, теоретические сведения по частной вирусологии, требования к уровню подготовленности студентов. К каждой теме даются контрольные вопросы, ситуационные задачи и список рекомендуемой литературы. Работа содержит глоссарий основных понятий и определений по частной вирусологии.

Издание предназначено для иностранных студентов, обучающихся на 3 курсе по специальности «Лечебное дело».

УДК 576.858(075.8)

ББК 52.63я73

государственный университет, 2010

Курс «Частная медицинская вирусология» преподаётся студентам 3 курса медицинского факультета и является составной частью дисциплины «Микробиология, вирусология, иммунология». Общий объём аудиторных часов по дисциплине составляет 184. На медицинскую вирусологию отводится 11 часов, из которых 2 часа на лекции и по 3 часа на 3 лабораторных занятия. Настоящие методические рекомендации разработаны по темам соответствующим лабораторным работам. Существующий лабораторный практикум не содержит весь необходимый материал для усвоения данных тем.

Иностранным студентам сложно осваивать большой объём информации за 3 лабораторных занятия. Автор счёл целесообразным изложить в данном издании краткое описание возбудителей вирусных инфекций и патогенезы, вызываемых ими заболеваний.

К каждой теме даётся перечень контрольных вопросов; ситуационные задачи, которые позволят студентам оценить свою подготовленность по пройденной теме; список рекомендуемой литературы.

Справочная часть издания содержит характеристику основных понятий и терминов применяемых в современной вирусологии и схемы строения самых распространённых вирусов. Алфавитный порядок изложения терминологического словаря-справочника удобен для пользования.
ТЕМА 1. РНК-содержащие вирусы

Цель – изучение особенностей строения РНК-содержащих вирусов и патогенеза, вызываемых ими заболеваний.

Задачи :

1 – знать систематическое положение каждого возбудителя;

2 – знать морфологию и структуру возбудителей;

3 – изучить патогенез всех заболеваний, вызываемых данными возбудителями по плану: а) источник инфекции; б) способы заражения; в) входные ворота инфекции; г) стадии патогенеза;

4 – знать методы лабораторной диагностики заболевания;

5 – знать специфическую профилактику и специфическую терапию;

6 – уметь проводить дифференциацию между различными вирусами;

7 – владеть решением ситуационных задач по теме;

8 – владеть составлением ситуационных задач по теме.
Характеристика РНК-вирусов

Занятие 1

Семейство Orthomyxoviridae (от греч. orthos – прямой, myxa – слизь)

Род 1 - Influensavirus A, B

Вирус гриппа типа А

Вирус гриппа типа В

Род 2 - Influensavirus C

Вирус гриппа типа С

Особенности патогенеза гриппа

Источник – больной человек, носитель; способ заражения – воздушно-капельный. Инкубационный период – 1-3 дня. Продромальный период – общее недомогание, чувство разбитости. Основные симптомы – быстрое повышение температуры до 37,5-38 0 С с сопутствующими миалгиями , насморком, кашлем, головными болями; продолжительность лихорадочного периода 3-5 суток. Вирус гриппа А – нейротропен, поэтому возможно развитие нейротоксикоза. Развивается катар верхних дыхательных путей (сухой кашель, боли за грудиной, ринит). Возможна геморрагическая пневмония и отёк лёгких, в результате чего быстро наступает смерть. Редко и чаще у детей бывает абдоминальный синдром (боли в животе, тошнота, рвота, диарея).

Лабораторная диагностика

Экспресс-диагностика. Обнаруживают вирусные антигены в исследуемом материале (носоглоточное отделяемое) с помощью реакции иммунофлюоресценции (РИФ) (прямой и непрямой варианты) и иммуноферментного анализа (ИФА). Можо обнаружить в материале геном вирусов при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Вирусологический метод. Заражают культуры клеток HeLa-2, через сутки при микроскопии обнаруживают мелкоочаговую дегрануляцию в клеточной культуре. Индикацию вирусов проводят и по образованию «бляшек», «цветной пробе», реакции гемагглютинации и реакции гемадсорбции. Идентифицируют вирусы по антигенной структуре. Применяют реакцию связывания комплемента, реакцию торможения гемагглютинации и реакцию биологической нейтрализации вирусов.

Серологический метод. Диагноз ставят при четырёхкратном увеличении титра антител в парных сыворотках от больного, полученных с интервалом в 10-14 дней. При постановке реакции нейтрализации цитопатического эффекта положительный результат отмечают при внесении сыворотки типа А. применяют реакцию торможения гемагглютинации, реакцию связывания комплемента, реакцию иммунофлюоресценции, иммуноферментный анализ. Специфическая профилактика – живая аттенуированная вакцина, убитая вакцина, сплит-вакцины, химическая вакцина. Специфическая терапия – противогриппозный γ-глобулин.

Семейство Paramyxoviridae (от лат. рara – около)

Род 1 – Respirovirus – вирусы парагриппа 1 и 3 типов

Род 2 – Rubulavirus – вирусы эпидемического паротита и парагриппа 2 и 4 типов

Род 3 – Morbilivirus – вирус кори

Род 4 – Pneumovirus – респираторно-синцитиальный вирус (РС-вирус)

Особенности патогенеза парагриппа

Источник – больной человек, носитель; способ заражения – воздушно-капельный. Инкубационный период – 3-6 суток; у взрослых – в форме катаров верхних отделов дыхательных путей (ларингит); у детей – протекает тяжелее, часто с симптомами интоксикации, наиболее часто наблюдают ларинготрахеобронхит с развитием ложного крупа; у детей до года – бронхиолиты с пневмониями.

Лабораторная диагностика

Вирусологический метод. От больного берут слизь или смыв из дыхательных путей , мокроту и заражают культуру клеток. Индикацию проводят по цитопатическому действию вирусов, реакции гемагглютинации. Идентификацию осуществляют с помощью реакции торможения гемагглютинации, реакции связывания комплемента, реакции нейтрализации.

Серологический метод . Для выявления антигенов вируса и для обнаружения антител в парных сыворотках крови больного проводят реакцию торможения гемагглютинации, реакцию связывания комплемента, реакцию нейтрализации (ретроспективная диагностика). Специфическая профилактика и специфическая терапия – отсутствуют.

Особенности патогенеза эпидемического паротита, или «свинки»

Источник – больной человек; способ заражения – воздушно-капельный. Инкубационный период – 14-21 день. Типичная форма заболевания проявляется как одно- или двусторонний паротит, сопровождающийся лихорадкой. Инфицировании околоушных слюнных желёз происходит путём гематогенного распространения вируса, возникающего через 3-5 суток появления первых симптомов. Вирусемия приводит к дессиминированию вируса по всему организму; возможны серозные менингиты, эпидидимоорхиты, как следствие – бесплодие. Иммунитет стойкий.

Лабораторная диагностика

Вирусологический метод. Исследуемым материалом (слюна, цереброспинальная жидкость, моча, сыворотка крови) заражают культуру клеток куриных фибробластов или куриный эмбрион. Вирус идентифицируют с помощью реакции торможения гемагглютинации, реакции иммунофлюоресценции, реакции нейтрализации, реакции связывания комплемента.

Серологический метод. В парных сыворотках больного определяют антитела с помощью иммуноферментного анализа, реакции связывания комплемента, реакции торможения гемагглютинации. Специфическая диагностика – живая вакцина, ассоциированная вакцина (против кори, паротита, краснухи). Специфическая терапия – отсутствует.

Особенности патогенеза кори

Источник – больной человек (чаще дети 4-5 лет); способы заражения – воздушно-капельный, реже контактный. Инкубационный период – 8-15 дней. Острые респираторные проявления (ринит, фарингит, конъюнктивит, фотофобия, температура 38,8-39 0 С). На 3-4 день на слизистых оболочках и коже появляются пятнисто-папулёзная сыпь: сначала на лице, затем на туловище и конечностях. За сутки до появления сыпи на слизистой оболочке щёк появляются мелкие пятна, окружённые красным ореолом. Заболевание продолжается 7-9 дней, сыпь исчезает, не оставляя следов. Иммунитет пожизненный.

Лабораторная диагностика

Вирусологический метод. Исследуют смыв из носоглотки, соскобы с элементов сыпи, кровь, мочу. Вирус обнаруживают в патологическом материале и в заражённых культурах клеток с помощью реакции иммунофлюоресценции , реакции торможения гемагглютинации и реакции нейтрализации. Характерно наличие многоядерных клеток и антигенов возбудителя в них.

Серологический метод. Для серологической диагностики применяют реакцию связывания комплемента, реакцию торможения гемагглютинации и реакцию нейтрализации. Специфическая профилактика – живая аттенуированая вакцина. Специфическая терапия – отсутствует.

Особенности патогенеза заболеваний, вызываемых респираторно- синцитиальным вирусом

Источник – больной человек; способы заражения – воздушно-капельный, контактно-бытовой. Возбудитель проникает в эпителиальные клетки верхних дыхательных путей, размножается, вызывая их гибель, патологический процесс распространяется на нижние дыхательные пути, развивается вторичный иммунодефицит, что приводит к развитию вторичных бактериальных инфекций. Инкубационный период – 3-5 дней. Признаки ОРЗ, затем трахеобронхит, пневмония. Иммунитет непродолжительный, возможны рецидивы.

Лабораторная диагностика

Вирусологический метод. Исследуемым материалом (отделяемое носоглотки, ткань лёгких) заражают культуры клеток. Индикацию вирусов проводят по характеру цитопатического действия – образованию синцития, а идентификацию вирусов – с помощью реакции нейтрализации, реакции связывания комплемента.

Серологический метод. Обнаружение специфического антигена проводят с помощью реакции иммунофлюоресценции, иммуноферментного анализа (экспресс-диагностика).

Вирусоскопический метод. При микроскопическом (гистологическом) исследовании в эпителии слизистой оболочки бронхов обнаруживают многоядерные клетки и синцитий. Специфическая профилактика и специфическая терапия – отсутствуют.

Контрольные вопросы:

1. 
   Вирус гриппа: систематика, строение, патогенез заболевания, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия.
2. 
   Вирус парагриппа: систематика, строение, патогенез заболевания, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия.
3. 
   Вирус паротита: систематика, строение, патогенез заболевания, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия.
4. 
   Вирус кори: систематика, строение, патогенез заболевания, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия.
5. 
   Респираторно-синцитиальный вирус: систематика, строение, патогенез заболевания, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия.

1. 
   Поступил материал (соскобы с элементов сыпи) от ребёнка с острыми респираторными проявлениями, фотофобией, температурой 38,8-39,0 0 С и пятнисто-папулёзной сыпью на слизистых оболочках и коже. При заражении культур клеток были обнаружены многоядерные клетки. Определите возбудителя.
2. 
   Поступил материал (отделяемое носоглотки) от ребёнка с признаками острого респираторного заболевания. С помощью вирусологического метода произвели индикацию возбудителя. В культуре клеток наблюдалось образование синцития. Определите возбудителя заболевания.

Семейство Picornaviridae

Род 1 – Enterovirus – вирусы полиомиелита, Коксаки, ЕСНО-вирусы

Особенности патогенеза полиомиелита

Источник – больной человек; способ заражения – фекально-оральный; воздушно-капельный; контактный. Инкубационный период – 7-14 дней. Различают 3 клинические формы полиомиелита: паралитическую, менингеальную, абортивную. Заболевание начинается с повышения температуры тела, общего недомогания, головных болей, рвоты, болей в горле. Паралитическую форму чаще вызывает вирус полиомиелита серотипа 1. Иммунитет пожизненный.

Лабораторная диагностика

Вирусологический метод. Материалом для исследования служат кал, отделяемое носоглотки, при летальных исходах – кусочки головного и спинного мозга, лимфатические узлы. Культуры клеток заражают исследуемым материалом. О репродукции вирусов судят по цитопатическому действию. Идентифицируют (типируют) выделенный вирус с помощью типоспецифических сывороток в реакции нейтрализации в культуре клеток.

Серологический метод. Серодиагностика основана на использовании парных сывороток больных с применением эталонных штаммов вируса в качестве диагностикума. Содержание сывороточных иммуноглобулинов классов IgG, IgA, IgM определяют методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. Специфическая профилактика – массовая иммунизация детей пероральной живой вакциной из 3-х серотипов. Специфическая терапия – отсутствует.

Особенности патогенеза заболеваний, вызываемых вирусами Коксаки

Источник – больной человек; способ заражения – фекально-оральный, контактный. Инфекции часто наблюдают у детей. Обычно отмечают симптомы простуды или лихорадку неясного генеза. В редких случаях развиваются тяжёлые поражения – пузырчатка полости рта и конечностей, эпидемическая плевродиния, перикардиты и миокардиты. Острые кишечные вирусные заболевания вызывают только вирусы группы А.

Лабораторная диагностика

Вирусологический метод. Материалом для исследования являются испражнения, отделяемое носоглотки. Заражают культуры клеток HeLa или почек обезьян (Коксаки В, отдельные серотипы Коксаки А) или мышей сосунков. Учитывают характер патологических изменений у заражённых мышей. Вирусы идентифицируют в реакции торможения гемагглютинации, реакции связывания комплемента, реакции нейтрализации и иммуноферментном анализе. Специфическая профилактика и специфическая терапия – отсутствуют.

Особенности патогенеза заболеваний, вызываемых ЕСНО-вирусами

Источник – больной человек; способ заражения – фекально-оральный, воздушно-капельный. Вирусы вызывают простудные инфекционные заболевания, асептические менингиты, протекающие относительно легко, реже восходящие параличи и энцефалиты, лихорадочное состояние, сопровождающееся кореподобными высыпаниями.

Лабораторная диагностика

Вирусологический метод. Вирус выделяют из цереброспинальной жидкости, испражнений, отделяемого носоглотки. Заражают культуры клеток почек обезьян и идентифицируют в реакции торможения гемагглютинации, реакции связывания комплемента, реакции нейтрализации и иммуноферментном анализе.

Серологический метод. В сыворотке крови выявляют нарастание титра антител, используя реакцию торможения гемагглютинации, реакцию связывания комплемента, реакцию нейтрализации и иммуноферментный анализ. Специфическая профилактика и специфическая терапия – отсутствуют.
Семейство Togaviridae

Род 1 – Rubivirus – вирус краснухи

Особенности патогенеза краснухи

Источник – больной человек, носитель; способы заражения – воздушно-капельный, трансплацентарный. Различают 2 формы болезни: 1 – приобретённая. Инкубационный период – 11-24 дня. Заболевание начинается с незначительного повышения температуры и лёгких катаральных симптомов, конъюнктивита, а также увеличения заднешейных и затылочных лимфатических узлов. В последующем появляется пятнисто-папулёзная сыпь по всему телу. Иммунитет стойкий.

2 – врождённая – медленная вирусная инфекция, развивающаяся в результате внутриутробного трансплацентарного заражения плода. Заболевание характеризуется развитием катаракты, глухоты и пороков сердца, а также других аномалий развития. Слепота в сочетании с глухотой и поражением ЦНС приводит к умственной отсталости. Иммунитет нескойкий.

Лабораторная диагностика

Вирусологический метод. Выделяют вирус из смывов со слизистой оболочки носа и зева, крови, мочи, реже – испражнений, а также внутренних органов погибших детей. Заражают исследуемым материалом чувствительные клетки, индикацию вирусов осуществляют на основании интерференции с цитопатогенными вирусами или по обнаружению цитопатического действия.

Серологический метод. Для обнаружения антител применяют реакцию нейтрализации, реакцию связывания комплемента, реакцию торможения гемагглютинации, иммуноферментный анализ. Диагностическое значение имеет четырёхкратное и более увеличение титров антител в динамике заболевания, а также определение специфических IgM, свидетельствующих о недавно перенесённом заболевании или болезни в момент обследования. Специфическая профилактика – живая вакцина, ассоциированная вакцина. Специфическая терапия – отсутствует.

Семейство Rhabdoviridae

Род 1 – Lessavirus – вирус бешенства

Особенности патогенеза бешенства

Источники – дикое бешенство – лисы, волки, грызуны, летучие мыши, городское бешенство – собаки, кошки; способы заражения – контактный при укусах, реже – при обильном ослюнении повреждённых покровов, возможен аэрогенный в пещерах населённых летучими мышами, иногда алиментарный. Вирус, попав со слюной больного животного в повреждённые наружные покровы, реплицируется и персистирует в месте внедрения. Затем распространяется по аксонам периферических нервов, достигает клеток головного и спинного мозга, где размножается. В цитоплазме нейронов мозга обнаруживаются тельца Бабеша-Негри. Клетки претерпевают дегенеративные изменения. Размножившись вирус попадает из мозга по центробежным нейронам в различные ткани, в том числе в слюнные железы. Инкубационный период от 10 дней до 3 месяцев, иногда до года. В начале заболевания – недомогание, страх, беспокойство, бессонница, затем развиваются рефлекторная возбудимость, спазматические сокращения мышц глотки и гортани. Судороги усиливаются при попытке пить, при виде льющейся воды, от яркого света, шума. Развиваются галлюцинации, а в конце болезни – параличи мышц конечностей и дыхания. Реже болезнь развивается без возбуждения и водобоязни; развивается паралич и слюнотечение. Летальность – 95%. Постинфекционный иммунитет не изучен.

Лабораторная диагностика

Вирусоскопический метод. Постмортальная диагностика включает обнаружение телец Бабеша-Негри в мазках отпечатках или срезах из ткани мозга. Тельца Бабеша-Негри выявляют методами окраски по Романовскому-Гимзе, Манну, Туревичу, Муромцеву и др.

Вирусологический метод. Патологический материал интрацеребрально вводят белым мышам. Идентификацию вирусов проводят с помощью иммуноферментного анализа, а также реакции нейтрализации на мышах, используя для нейтрализации вируса антирабический иммуноглобулин.

Серологический метод. Определяют антитела у больных с помощью реакции связывания комплемента, иммуноферментного анализа. Специфическая профилактика и терапия – инактивированная вакцина Ферми, генно-инженерная вакцина. Иммунизируют людей укушенных подозрительными на бешенство животными. При этом активный иммунитет формируется во время инкубационного периода. При множественных укусах создают пассивный иммунитет введением антирабического иммуноглобулина.

Семейство Retroviridae

Род 1 – Lentivirus - ВИЧ

Особенности патогенеза ВИЧ-инфекции

Источник – больной человек, носитель; способы заражения – половой, парентеральный, трансплацентарный. Стадии ВИЧ-инфекции:

1 – инкубационный период – 2-4 недели;

2 – стадия первичных проявлений: острая лихорадка, лимфоденопатия, диарея, завершается стадия бессимптомной фазой, восстановлением самочувствия, может продолжаться годами;

3 – стадия вторичных заболеваний, проявляющихся поражением дыхательной, нервной систем, желудочно-кишечного тракта, возникновением злокачественных опухолей в различных сочетаниях;

4 – стадия – собственно СПИД, характеризуется кахексией, упорной диареей, адинамией, анемией, деменцией, снижением всех иммунных показателей с летальным исходом.

Лабораторная диагностика

Серологический метод. Для подтверждения диагноза определяют антитела к белкам gp41, gp120, gp160, р24 у ВИЧ-1 и антитела к белкам gp36, gp105, gp140 у ВИЧ-2. ВИЧ-антитела появляются через 2-4 недели после инфицирования и определяются на всех стадиях ВИЧ-инфекции и при СПИДе. При любой положительной пробе для подтверждения результатов ставится реакция иммуноблоттинга. Применяют также ПЦР. Специфическая профилактика и специфическая терапия – отсутствуют.

Контрольные вопросы:

1. 
   Вирус полиомиелита: систематика, строение, патогенез заболевания, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия.
2. 
   Вирус Коксаки: систематика, строение, патогенез заболевания, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия.
3. 
   ЕСНО-вирус: систематика, строение, патогенез заболевания, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия.
4. 
   Вирус краснухи: систематика, строение, патогенез заболевания, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия.
5. 
   Вирус бешенства: систематика, строение, патогенез заболевания, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия.
6. 
   Вирус иммунодефицита человека: систематика, строение, патогенез заболевания, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия.

1. 
   Поступил материал для исследования (смыв со слизистой оболочки носа и зева) от ребёнка с лёгкими катаральными симптомами и увеличенными заднешейными и затылочными лимфатическими узлами. Произвели заражение культуры клеток, в которых после инкубации обнаружили ЦПД. Определите возбудителя.
2. 
   Поступил материал для исследования (испражнения) от ребёнка с признаками общего недомогания , головной болью, повышенной температурой. Произвели посев в культуру клеток, в которых после инкубации были обнаружены вирусные частицы устойчивые к эфиру. Определите возбудителя.

Литература

1. 
   Большой словарь медицинских терминов / Сост. Федотов В.Д. – М.: ЗАО Центрполиграф, 2007.
2. 
   Воробьёв А.А. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник. – М.: МИА, 2004.
3. 
   Воробьёв А.А., Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. – М.: МИА, 2003.
4. 
   Воробьёв А.А., Кривошеин Ю.С., Широбоков В.П. Медицинская и санитарная микробиология. – М.: АСАDEMA, 2003.
5. 
   Голубев Д.Б. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии. – Л., 1986. Электронный учебник.
6. 
   Красильников А.П., Романовская Т.Р. Микробиологический словарь-справочник./ - 2-е изд., доп. и перераб. – Мн.: «Асар», 1999.
7. 
   Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник для мед. вузов. – 3-е изд., испр. и доп. – СПб.: СпецЛит, 2002.
8. 
   Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник / Под ред. А.А. Воробьёва – М.: Медицинское информационное агентство, 2004.
9. 
   Общая медицинская вирусология / Н.С. Горячкина и др.; под ред. Н.С. Горячкиной, Л.И. Кафарской. – Ростов н/Д: Феникс, 2007.
10. 
    www. infections.ru/rus/all/mvb journals .shtml